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台式低速新2最新电脑网址提取细胞质和细胞核蛋白离心详细步骤

發布時間:2021-09-08      點擊次數:158
   台式低速新2最新电脑网址,轉速一般不超過4000r/min,最大容量爲2~4L,是實驗室于大量初級分離提取生物大分子、沈澱物等。其轉頭多用鋁合金制的甩平式和角式兩種,離心管有硬質玻璃、聚乙烯硬塑料和不鏽鋼管多種型號。離心機裝配有驅動電機、定時器、調整器(速度指示)和制冷系統(溫度可調範圍爲-20~+40℃),可根據離心物質所需,更換不同容量和不同型號轉速的轉頭。
  台式低速新2最新电脑网址提取细胞质和细胞核蛋白离心详细步骤:
  1.決定細胞生長狀態,細胞生長狀態應該是80%或者更好:
  2.用離心機以1500r/min離心5min
  3.棄上清液,用等體積的冷PBS洗細胞,像步驟2那樣,反複3次
  4.根據估計的沈澱量加入5倍體積的isotoniclysisbuffer到細胞顆粒中,使細胞溫和懸浮,盡量避免泡沫
  5.加入裂解液lysisbuffer在懸浮的細胞中,並放在冰上15min讓細胞膨脹,可以通過顯微鏡檢查
  6.對于細胞實驗中膨脹的細胞,加入10%的IGEPALCA-630使最後的濃度達到0.3%,混勻,加的時候要溫和
  7.立即離心(量大的可以用1.5ml的EP管,以5500r/min離心30s;量大的可以用50ml的管子以5500r/min離心2min)
  8.轉移上清液(細胞質蛋白)到一個新的冷凍管中
  9.用懸浮顆粒5倍體積的isotoniclysisbuffer懸浮細胞,並混勻
  10.用離心機離心細胞懸浮液,以1500r/min離心5min,移掉上清液
  11.用2/3倍體積的extractionbuffer懸浮顆粒
  12.把管子放置在震蕩混勻器上,以700r/min,15min震蕩混勻,接著以1400r/min,15min,整個過程要仔細,避免泡沫産生
  13.以9400r/min離心15min,低溫離心完後轉移上清液到一個新的冷凍離心管中
  14.分成幾份用液氮冷凍,並且保存起來(長期保存應放在-80℃上,短期保存要放在-20℃上)

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